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当我们提取核酸时,都发生了什么?

更新日期:2021年4月13日 大字 小字

2020年初, “核酸检测”的概念由于众所周知的原因突然正式“出圈”,成为了一时之间大众口中的热词。此中,自动化核酸提取设备由于操作简单、通量高、速度快的优点而迎来了罕见的广泛追捧,那么,当它究竟都实现了哪些工作呢?

 

有些小伙伴可能反手就是一个流程原理图:


那更进一步的解释呢?

重点来了!

裂解:通常裂解液中会含有洗涤剂,根据样本的不同还会添加蛋白酶,用于裂解和溶解蛋白质;另外还有高浓度的离液盐,如异硫氰酸胍,它能扰乱氢键,破坏核酸与水之间的结合,使核酸能够与磁珠结合。


通过这里我们能够理解:1.为什么裂解步骤经常需要加热;2.为什么裂解液会容易起泡;3.为什么裂解的步骤需要长时间的混合。

洗涤:洗涤液中通常含有较大比例的乙醇,一方面能降低溶液介电常数使核酸沉淀以更好的结合,另一方面能洗去残留的盐;有时候这里还会有部分离液盐,用以去除上一步残留的蛋白质。


通过这里我们能够理解:1.添加无水乙醇的作用;2.不同洗涤步骤的目的区别。

洗脱:由于在上一步中经过了较大体积的乙醇,在正式洗脱磁珠之前通常会经过“晾干”,充分利用乙醇的易挥发性,避免乙醇的残留影响后续的实验。当乙醇被去除,核酸分子恢复亲水性,在弱碱性的洗脱液中,核酸被轻易地溶解,从而从磁珠上被解放出来。

至此,完整的核酸提取流程就结束了,通过流程的清晰化,能够更好地优化试剂盒-仪器之间的磨合,缩短磨合时间,节约时间、人力与经济成本。



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